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鑒別ATCC細胞株真?zhèn)蔚姆椒?/h1>

原載自:tljr.com.cn[技術(shù)資料頻道]  2017-10-24  瀏覽次數(shù):2247

   ATCC細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的培養(yǎng)物稱為ATCC細胞株,也就是說,ATCC細胞株是用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法,由單細胞增殖形成的細胞群。ATCC細胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。
  原代培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后即為細胞系,由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細胞世系所組成。如果不能繼續(xù)傳代,或傳代次數(shù)有限, 可稱為有限細胞系,如可以連續(xù)培養(yǎng), 則稱為連續(xù)細胞系,培養(yǎng)50代以上并無限培養(yǎng)下去。 所以ATCC細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志的培養(yǎng)細胞。從培養(yǎng)代數(shù)來講,可培養(yǎng)到40-50代。ATCC細胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。對于人類腫瘤細胞,在體外培養(yǎng)半年以上,生長穩(wěn)定,并連續(xù)傳代的即可稱為連續(xù)性株或系。
  鑒別ATCC細胞株真?zhèn)蔚姆椒ǎ?/div>
  一.利用干擾實驗即可辨別ATCC細胞株是否檢測目的抗原,方法如下:
  (1) 將針對試劑盒特異性的重組蛋白抗原和試劑盒中的檢測抗體配置成antibody: antigen≈1:2的混合孵育液(2) 37℃孵育15分鐘后,代替原試劑盒中的檢測抗體(3) 后續(xù)操作按照試劑盒說明書進行,加檢測抗體、酶復(fù)合物和底物(4) 實驗完畢后,檢測其標(biāo)準(zhǔn)曲線,如果標(biāo)準(zhǔn)曲線良好則說明加入的目的抗原和試劑盒抗體不匹配,試劑盒檢測抗體針對的是非目的抗原,該試劑盒為偽劣假造ATCC細胞株。 (5) 如果標(biāo)準(zhǔn)曲線無線性,則說明試劑盒檢測抗體已被目的抗原中和或干擾,影響了其實際試劑盒抗體的檢測作用,則該試劑盒檢測抗體針對的是目的抗原。
  二. 如果購買了兩盒同一公司的ATCC細胞株A和B,利用交叉實驗即可辨別ATCC細胞株是否造假,方法如下:
  (1) 取出購買的試劑盒A的包被板兩條。
  (2) 一條包被板加試劑盒A的標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
  (3) 另一條包被板加試劑盒B的標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
  (4) 后續(xù)操作按照試劑盒說明書進行,加檢測抗體、酶復(fù)合物和底物。
  (5) 實驗完畢后,檢測兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線,如果兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線一致則說明兩個ATCC細胞株檢測的同一個指標(biāo)而非A和B,即該試劑盒為偽劣假造ATCC細胞株。
  (6) 如果兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線不一致則說明兩個ATCC細胞株檢測的不同指標(biāo),試劑盒A只能檢測A,不能檢測B,即該試劑盒為正常的ATCC細胞株。

 

 

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