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技術文章 / article
ATCC細胞株穩(wěn)定整合試驗中的幾個關鍵因素
原載自:tljr.com.cn[技術資料頻道] 2018-12-25 瀏覽次數(shù):1949
ATCC細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物的培養(yǎng)物,也就是說,ATCC細胞株是用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法,由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。
ATCC細胞株無菌操作注意事項:
1.操作前要洗手,進入超凈臺后手要用75%酒精或0.2%新潔爾滅擦試。試劑等瓶口也要擦試。
2.點燃酒精燈,操作在火焰附近進行,耐熱物品要經常在火焰上燒灼,金屬器械燒灼時間不能太長,以免退火,并冷卻后才能夾取組織,吸取過營養(yǎng)液的用具不能再燒灼,以免燒焦形成碳膜。
3.操作動作要準確敏捷,但又不能太快,以防空氣流動,增加污染機會。
4.不能用手觸已消毒器皿的工作部分,工作臺面上用品要布局合理。
5.瓶子開口后要盡量保持45℃斜位。
6.吸溶液的吸管等不能混用。
ATCC細胞株穩(wěn)定整合試驗中的幾個關鍵因素:
1),外源插入片段的拷貝數(shù)。多數(shù)情況下,低拷貝甚至是單拷貝可以減少人為實驗因素的干擾。
2),整合的幾率,這不僅決定了穩(wěn)定株篩選的難易程度,而且還可以幫助人們更容易得到混合穩(wěn)定株。
3),整合位點的轉錄活躍度,決定了穩(wěn)定株中外源片段的表達質量。理想的狀況是單拷貝,但轉錄活性比較高。
4),整合后的穩(wěn)定性。不同的整合位點決定了外源片段在染色體中的穩(wěn)定性,有些區(qū)域易發(fā)生重組或者丟失,從而導致穩(wěn)定株再次丟失的情況。
5),使用混合穩(wěn)定株或者獲得多個不同單克隆穩(wěn)定株。因為穩(wěn)定整合往往伴隨這插入失活宿主內源基因,所以實驗時通過使用混合穩(wěn)定株,或者對多個單克隆穩(wěn)定株進行比較,可以幫助研究人員獲得更的實驗數(shù)據。
凍存的ATCC細胞株和雜交腐細胞株在運送過程中使用干冰保持低溫。收到細胞后,可以立即解凍復蘇,去除二甲基亞砜(DSMO0)后進行細胞培養(yǎng)。如果不立即復蘇培養(yǎng)細胞,必須將細胞凍存管放置于液氮罐氣相層儲存。請不要將細胞存儲在-130℃以上的溫度。如果溫度不夠低,達不到-130℃,細胞活力會立即下降。
ATCC細胞株產品附帶一份產品資料單,其中包含細胞株的信息和詳細的操作指南。細胞株的所有詳細介紹可以在ATCC找到 ,產品資料單也可以在ATCC下載。此外產品還附帶細胞株具體生產批次的檢測報告,其中包含批次的特定信息,如每只凍存管中細胞的數(shù)量,無微生物污染的檢測結果等。
ATCC細胞株無菌操作注意事項:
1.操作前要洗手,進入超凈臺后手要用75%酒精或0.2%新潔爾滅擦試。試劑等瓶口也要擦試。
2.點燃酒精燈,操作在火焰附近進行,耐熱物品要經常在火焰上燒灼,金屬器械燒灼時間不能太長,以免退火,并冷卻后才能夾取組織,吸取過營養(yǎng)液的用具不能再燒灼,以免燒焦形成碳膜。
3.操作動作要準確敏捷,但又不能太快,以防空氣流動,增加污染機會。
4.不能用手觸已消毒器皿的工作部分,工作臺面上用品要布局合理。
5.瓶子開口后要盡量保持45℃斜位。
6.吸溶液的吸管等不能混用。
ATCC細胞株穩(wěn)定整合試驗中的幾個關鍵因素:
1),外源插入片段的拷貝數(shù)。多數(shù)情況下,低拷貝甚至是單拷貝可以減少人為實驗因素的干擾。
2),整合的幾率,這不僅決定了穩(wěn)定株篩選的難易程度,而且還可以幫助人們更容易得到混合穩(wěn)定株。
3),整合位點的轉錄活躍度,決定了穩(wěn)定株中外源片段的表達質量。理想的狀況是單拷貝,但轉錄活性比較高。
4),整合后的穩(wěn)定性。不同的整合位點決定了外源片段在染色體中的穩(wěn)定性,有些區(qū)域易發(fā)生重組或者丟失,從而導致穩(wěn)定株再次丟失的情況。
5),使用混合穩(wěn)定株或者獲得多個不同單克隆穩(wěn)定株。因為穩(wěn)定整合往往伴隨這插入失活宿主內源基因,所以實驗時通過使用混合穩(wěn)定株,或者對多個單克隆穩(wěn)定株進行比較,可以幫助研究人員獲得更的實驗數(shù)據。
凍存的ATCC細胞株和雜交腐細胞株在運送過程中使用干冰保持低溫。收到細胞后,可以立即解凍復蘇,去除二甲基亞砜(DSMO0)后進行細胞培養(yǎng)。如果不立即復蘇培養(yǎng)細胞,必須將細胞凍存管放置于液氮罐氣相層儲存。請不要將細胞存儲在-130℃以上的溫度。如果溫度不夠低,達不到-130℃,細胞活力會立即下降。
ATCC細胞株產品附帶一份產品資料單,其中包含細胞株的信息和詳細的操作指南。細胞株的所有詳細介紹可以在ATCC找到 ,產品資料單也可以在ATCC下載。此外產品還附帶細胞株具體生產批次的檢測報告,其中包含批次的特定信息,如每只凍存管中細胞的數(shù)量,無微生物污染的檢測結果等。