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技術(shù)文章 / article
細(xì)胞株培養(yǎng)對(duì)于培養(yǎng)液的要求及相關(guān)常識(shí)說(shuō)明
原載自:tljr.com.cn[技術(shù)資料頻道] 2020-10-24 瀏覽次數(shù):1107
細(xì)胞株通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的培養(yǎng)物,也就是說(shuō)細(xì)胞株是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過(guò)篩選的方法,由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。
細(xì)胞株體外培養(yǎng)在培養(yǎng)液中應(yīng)能滿(mǎn)足細(xì)胞對(duì)營(yíng)養(yǎng)成分、促生長(zhǎng)因子、激素、滲透壓、pH等諸多方面的要求。
培養(yǎng)液pH對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響:
由于大多數(shù)細(xì)胞適宜PH值為7.2-7.4,偏離此范圍對(duì)細(xì)胞將產(chǎn)生有害的影響。各種細(xì)胞對(duì)PH值要求也不*相同,原代細(xì)胞培養(yǎng)一般對(duì)PH值變動(dòng)耐受差,無(wú)限細(xì)胞系耐受力強(qiáng)。
總體來(lái)說(shuō),細(xì)胞耐酸性比耐堿性強(qiáng)一些,偏酸環(huán)境中更有利于細(xì)胞的生長(zhǎng)。因此,配制培養(yǎng)用液時(shí)可把液體的PH值稍微調(diào)的偏酸一些。液體在經(jīng)過(guò)0.1um或0.2um濾膜過(guò)濾時(shí),PH值會(huì)向上浮動(dòng)0.2左右。
培養(yǎng)液滲透壓對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響:
當(dāng)細(xì)胞內(nèi)、外環(huán)境的分子濃度不同時(shí)就會(huì)產(chǎn)生滲透壓。這種情況下,水分通過(guò)滲透流入或流出細(xì)胞,從而改變細(xì)胞的內(nèi)環(huán)境。高滲透壓迫使水分從細(xì)胞中擴(kuò)散出來(lái)導(dǎo)致細(xì)胞收縮,這種情況會(huì)使DNA和蛋白遭到破壞,細(xì)胞周期停滯以及終使細(xì)胞死亡;反之,低滲透壓使水分流入細(xì)胞內(nèi),使細(xì)胞腫脹破裂。
培養(yǎng)液中谷氨酰胺的作用:
幾乎所有的細(xì)胞對(duì)谷氨酰胺都有較高的要求。谷氨酰胺脫掉氨基后,可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來(lái)源,參與蛋白質(zhì)的合成和能量代謝。在缺少谷氨酰胺時(shí),細(xì)胞生長(zhǎng)不良而死亡。所以各種培養(yǎng)液中都含有較大量的谷氨酰胺。
谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定,應(yīng)置-20℃冰凍保存,用前加入培養(yǎng)基中。加有谷氨酰胺的液體培養(yǎng)基4度冰箱儲(chǔ)存兩周以上時(shí),應(yīng)重新加入原來(lái)量的谷氨酰胺。