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淋巴母細(xì)胞株是如何構(gòu)建成功的?

原載自:tljr.com.cn[行情動(dòng)態(tài)]  2020-05-13  瀏覽次數(shù):1076

   細(xì)胞株是通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。如果不能繼續(xù)傳代或傳代數(shù)有限,稱(chēng)為有限細(xì)胞株(finitecell strain);如果可以連續(xù)傳代,稱(chēng)為連續(xù)細(xì)胞株(continuous cell strain)。對(duì)于人類(lèi)腫瘤細(xì)胞,在體外培養(yǎng)半年以上,生長(zhǎng)穩(wěn)定,并連續(xù)傳代的即可稱(chēng)為連續(xù)性株或系。
  有關(guān)人類(lèi)淋巴母細(xì)胞株的構(gòu)建:
  1.4ml肝素抗凝血于離心管中,加入2ml RPMI 1640;
  2.混勻后沿管壁緩慢加到預(yù)置有4ml淋巴細(xì)胞分離液的液面上靜置30min;
  3.1500rpm,15min,吸取白細(xì)胞層于另一離心管中;
  4.加RPMI 1640 5ml洗滌白細(xì)胞兩次;
  5.將白細(xì)胞接種至1ml RPMI 1640培養(yǎng)基中,加入10μl環(huán)胞霉素和100μl的EB(EB病毒)液,混勻;
  6.水浴搖床,40次/分,37℃,3hr;
  7.1500rpm,15min。將細(xì)胞接種至1ml培養(yǎng)基中(內(nèi)含谷氨酰胺1mM/ml)加入10μl環(huán)胞霉素,輕輕混勻,37℃培養(yǎng);
  8.待5天后觀察細(xì)胞轉(zhuǎn)化和生長(zhǎng)情況,決定是否半量換液。一般半量換液l—2次,并維持環(huán)胞霉素的濃度;
  9.待轉(zhuǎn)化細(xì)胞數(shù)量明顯上升,并出現(xiàn)細(xì)胞團(tuán)塊后,可轉(zhuǎn)入25ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶中,加1—2ml培養(yǎng)基,37℃培養(yǎng)10—15天,一般每隔3—4天觀察一次,決定是否換液、傳代;
  10.細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)一定數(shù)量后凍存,凍存前應(yīng)進(jìn)行核型分析和存檔。

 

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