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ATCC細(xì)胞株保溫的方式

原載自:tljr.com.cn[行情動(dòng)態(tài)]  2016-02-22  瀏覽次數(shù):1626

   ATCC細(xì)胞株保溫的方式除有的儀器附有特制的電熱塊外,一般均采用水浴,可將板置于水浴箱中,ELISA板底應(yīng)貼著水面,使溫度迅速平衡。為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,此時(shí)可讓反應(yīng)板漂浮在水面上。若用保溫箱,ELISA試劑盒應(yīng)放在濕盒內(nèi),濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等,在盒底墊濕的紗布,zui后將ELISA板放在濕紗布上。
  ATCC細(xì)胞株溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃等。37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的保溫溫度,也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度。在建立ELISA方法作反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究時(shí),實(shí)驗(yàn)表明,兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1~2小時(shí),產(chǎn)物的生成可達(dá)。為加速反應(yīng),可提高反應(yīng)的溫度,有些試驗(yàn)在43℃進(jìn)行,但不宜采用更高的溫度。抗原抗體反應(yīng)4℃更為*,在放射免疫測定中多使反應(yīng)在冰箱中過*,以形成zui多的沉淀。但因所需時(shí)間太長,在ELISA試劑盒中一般不予采用。
  怎樣才能知道我購買的ATCC細(xì)胞株質(zhì)量怎么樣、是否為偽劣產(chǎn)品?現(xiàn)在市場上有很多利用偽劣細(xì)胞株坑害科研工作者,唯利是圖,直接無視科學(xué)研究的嚴(yán)謹(jǐn)性。那么我們要如何去判斷一個(gè)ATCC細(xì)胞株產(chǎn)品的質(zhì)量呢?下面一起來看看細(xì)胞株內(nèi)在質(zhì)量檢測方法大曝光!
  *、利用干擾實(shí)驗(yàn)即可辨別ATCC細(xì)胞株是否檢測目的抗原具體方法如下:
  1.將針對細(xì)胞株特異性的重組蛋白抗原和細(xì)胞株中的檢測抗體配置成antibody: antigen≈1:2的混合孵育液2.37℃孵育15分鐘后,ATCC細(xì)胞株代替原細(xì)胞株3.后續(xù)操作按照ATCC細(xì)胞株說明書進(jìn)行,加檢測抗體、酶復(fù)合物和底物4.實(shí)驗(yàn)完畢后,檢測其標(biāo)準(zhǔn)曲線,如果標(biāo)準(zhǔn)曲線良好則說明加入的目的抗原和細(xì)胞株抗體不匹配,細(xì)胞株檢測抗體針對的是非目的抗原,ATCC細(xì)胞株該細(xì)胞株為偽劣假造細(xì)胞株。
  5.如果標(biāo)準(zhǔn)曲線無線性,則說明細(xì)胞株檢測抗體已被目的抗原中和或干擾,影響了其實(shí)際細(xì)胞株抗體的檢測作用,則該細(xì)胞株檢測抗體針對的是目的抗原。
  ATCC細(xì)胞株濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)定的溫度,特別是在氣溫較低的時(shí)候更應(yīng)如此。無論是水浴還是濕盒溫育,反應(yīng)板均不宜疊放,以保證各板的溫度都能迅速平衡。室溫溫育的反應(yīng),操作時(shí)的室溫應(yīng)嚴(yán)格限制在規(guī)定的范圍內(nèi),標(biāo)準(zhǔn)室溫溫度是指20~25℃,但具體操作時(shí)可根據(jù)說明書的要求控制溫育。ATCC細(xì)胞株室溫溫育時(shí),只要平置于操作臺上即可。應(yīng)注意溫育的溫度和時(shí)間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確。為保證這一點(diǎn),一個(gè)人操作時(shí),一次不宜多于兩塊板同時(shí)測定。
 

 

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